數(shù)字PCR的運(yùn)行階段

　　數(shù)字PCR是一種核酸檢測(cè)和定量的新方法。同傳統(tǒng)PCR以及qPCR相比，增加了一步分液的操作，將幾十微升的已經(jīng)配好的包含有引物、模板、buffer、酶等組分的PCR反應(yīng)體系分隔成了眾多微小的、獨(dú)立的反應(yīng)體系，這樣能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù)，對(duì)起始樣品定量，通過(guò)將一個(gè)樣本分成幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子( DNA 模板) ，在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)各個(gè)反應(yīng)單元的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。如下圖：
 

　　PCR 運(yùn)行可以分為三個(gè)階段：
 

　　指數(shù)期
 

　　每個(gè)循環(huán)積聚的產(chǎn)物準(zhǔn)確加倍(假定 100% 反應(yīng)效率)。該反應(yīng)具有高度特異性和準(zhǔn)確度。出現(xiàn)指數(shù)式擴(kuò)增，因?yàn)樗性噭┚迈r可用，反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)推動(dòng)反應(yīng)有利于擴(kuò)增子加倍。
 

　　線性期(高變異性)
 

　　隨著反應(yīng)繼續(xù)，一些試劑因擴(kuò)增而被消耗。反應(yīng)開始減緩，并且每個(gè)循環(huán)的 PCR 產(chǎn)物不再加倍。
 

　　平臺(tái)期(終點(diǎn)：使用傳統(tǒng)方法進(jìn)行凝膠檢測(cè))
 

　　反應(yīng)停止，不再產(chǎn)生更多產(chǎn)物，并且如果放置時(shí)間夠長(zhǎng)，PCR 產(chǎn)物將開始降解。因?yàn)槊總€(gè)樣品具有不同的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，所以每支試管或每個(gè)反應(yīng)將在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)入平臺(tái)期。在平臺(tái)期可以看到這些差異。在平臺(tái)期內(nèi)，傳統(tǒng) PCR 進(jìn)行測(cè)量，又稱為終點(diǎn)檢測(cè)。
 

　　數(shù)字PCR檢測(cè)的是游離DNA，采血管為游離DNA管，采樣5-10ml。檢測(cè)過(guò)程包括核酸提取、芯片制備、PCR擴(kuò)增、芯片閱讀、結(jié)果分析，實(shí)現(xiàn)全程基本自動(dòng)化、封閉式操作，避免污染。無(wú)需培養(yǎng)，節(jié)省時(shí)間；高靈敏度，提高檢出率；多色熒光檢測(cè)，一管血可檢測(cè)23個(gè)靶標(biāo)，節(jié)省寶貴樣本，幫助解決“檢出率低”和“檢測(cè)周期長(zhǎng)”兩大痛點(diǎn)，達(dá)到早期診斷、療效監(jiān)測(cè)的目的。